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면역치료

백혈병(2023)이 기사를 인용하세요

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HLA 반일치 이식에서 T 조절 세포(Treg)는 기존 T 세포(Tcons)와 공동 주입되어 이식편 대 백혈병 효과(GvL)를 유지하면서 이식편대숙주병(GvHD)으로부터 보호합니다[1,2,3] . GvHD 예방은 수지상 세포(DC)에서 CD80/CD86의 CTLA-4 의존성 하향 조절로 인한 것일 수 있지만[4] GvL 효과는 T 세포의 확장을 감소시키는 Treg의 능력과 연결될 수 있지만 T 세포의 활성화는 아닙니다. 5]. 여기에서는 이식된 환자의 골수에서 CD161+ Tregs의 선택적 위치를 설명했습니다. 전염증성 사이토카인을 생산할 수 있는 것으로 이미 설명된 이 집단은 GvL 효과를 유지할 수 있는 미세 환경을 개발하는 데 기본이 될 수 있습니다. 20명의 환자가 모집되었고(보충 방법) 2 x 106/kg Treg, 1 x 106/kg Tcon 및 메가도스의 CD34+ 세포가 포함된 haplo-HSCT를 받았습니다[1,2,3]. 말초혈액(PB)과 골수(BM) 샘플은 이식 후 1, 3, 6, 12개월에 수집되었습니다.

BM- 및 PB-DC는 보충 표 1에 나열된 항체를 사용하여 BD FACS Lyric System (BD Biosciences, La Jolla, CA)에서 분석되었습니다. DC는 항 CD123 (형질 세포성 DC, pDC의 경우) 및 항 - CD11c Ab(골수성 DC, mDC용)(보충 표 1) 및 실시간 RT-PCR을 통해 인돌아민 2,3-디옥시게나제 1(IDO-1), 인터루킨(IL)-6, IL의 발현을 분석했습니다. -10, 프로그래밍된 사멸 리간드 1(PD-L1) 및 형질전환 성장 인자 베타 1(TGFB1)(보충 표 2). BM- 및 PB-CD11c+ DC를 환자로부터 수집하고 자가 CD3+ 세포와 공동 배양했습니다. CD161+ Treg를 생성하기 위해 건강한 기증자(HD)의 PB에서 세포를 정제하고 IL-2, IL-6 및 TGF-β와 함께 배양하고 기능 분석에 사용했습니다(보충 방법 참조).

Student t-test와 ANOVA 분석을 수행한 후 Tukey와 Sidak의 다중 비교 테스트를 수행했습니다. 모든 통계 테스트는 Stata 버전 13(StataCorp, College Station, TX, USA; RRID:SCR_012763) 및 GraphPad Prism 소프트웨어 버전 9(RRID: SCR_002798, San Diego, CA, USA)를 사용하여 α 수준 0.05에서 평가되었습니다. .

등록된 환자의 임상 결과(GvHD; 재발률; TRM)는 발표된 데이터와 일치했습니다[3]. 등록된 모든 환자는 완전 기증자 키메라 현상을 보입니다. 유세포 분석 결과, 이식 후 첫 달에 mDC의 비율이 PB(범위 0-0.18%) 샘플보다 BM(범위: 0.16-2.03%)에서 유의하게 더 높았다는 것이 밝혀졌습니다(그림 1A). BM 유래 mDC는 이식 12개월 후 더 높은 수준의 공동자극 수용체 CD86(MFI 범위 PB: 411-548, BM: 603-859)을 발현했습니다(그림 1B). pDC에서는 차이가 나타나지 않았습니다. RT-PCR은 PB-mDC에서 IL-6 및 TGF-β 발현이 이식 후 점차 감소한 반면 BM-mDC에서는 거의 변하지 않은 것으로 나타났습니다 (그림 1C, D). 이로 인해 이식 후 12개월 후에 PB-mDC의 IL-6 분비는 BM-mDC보다 현저히 낮았습니다(그림 1C). 반면, 면역 체크포인트 조절자인 PD-L1의 발현은 BM-mDC에 비해 PB-mDC에서 매우 높게 유지되었습니다(그림 1E). 이는 PB-mDC에 면역억제 특성이 있음을 나타냅니다. 보조자극 분자와 면역 체크포인트의 발현은 Carenza et al.과 유사했습니다. [7].

A 이식 후 첫 달에 mDC 비율은 PB보다 BM에서 더 높았습니다(*학생 t-테스트: p < 0.05). B BM 유래 mDC는 PB 유래 mDC와 비교하여 더 높은 수준의 보조자극 수용체 CD86(MFI 값으로 표시)을 나타냈습니다(**스튜던트 t-테스트: p < 0.01). C, D 실시간 RT-PCR은 이식 후 PB-mDC에서 IL-6 및 TGF-β 발현이 점진적으로 감소하는 반면 BM-mDC의 수준은 안정적으로 유지되는 것으로 나타났습니다. (*학생의 t-검정: p < 0.05). E 실시간 RT-PCR은 BM-mDC에 비해 PB-mDC에서 PD-L1 수준이 유의하게 더 높았습니다(*학생 t-검정: p < 0.05; ***학생 t-검정: p < 0.001). 모든 데이터(A~E)는 평균 ± SD로 표시됩니다. F CD3+, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 백분율은 BM과 PB 사이와 초기 및 후기 추적 단계(ANOVA: p > 0.05) 사이에서 비슷했습니다(학생의 t-테스트: p > 0.05). 데이터는 평균으로 표시됩니다. G 왼쪽 패널. BM 유래 CD8+ T 세포는 PB 유래 CD8+ T 세포보다 공동자극 수용체 CD28의 더 높은 발현을 나타냈습니다(30.3% ± 18.8 대 9.2% ± 4.9; *학생의 t-검정: p < 0.05). 데이터는 평균 ± SD로 표시됩니다. 오른쪽 패널. 면역 체크포인트 억제제 PD-1의 발현은 PB 유래 CD4+(69% ± 29 대 24% ± 11; *학생 t-테스트: p < 0.05) 및 CD8+(65% ± 25 대 4% ±)에서 유의하게 더 높았습니다. 3; *학생 t-검정: p < 0.05) BM 유래 T 림프구보다 T 세포. 데이터는 평균 ± SD로 표시됩니다. H CD3+/CFSE+-mDCs 공동 배양은 T 세포가 BM-mDC 존재 하에서 배양되었을 때 훨씬 더 높은 T 세포 증식률을 보여주었습니다(25% ± 7.2 대 6.7% ± 8.7; *학생의 t-검정: p < 0.05 ). 데이터는 3회 독립적 실험의 평균 ± SD로 표시됩니다.